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【Nature 一作亲授科研秘籍!】
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文章解读:《In vitro reconstitution of meiotic DNA double-strand break formation》
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免疫组化是应用抗原与抗体特异性结合的原理,通过化学反应使标记抗体的显色剂(荧光素、酶、金属离子、同位素)显色来确定组织细胞内抗原(多肽和蛋白质),对其进行定位、定性及相对定量的研究。
蛋白酶是水解蛋白质肽链的一类酶的总称,主要作用是催化蛋白质水解。
按其水解多肽的方式,可以将其分为内肽酶和外肽酶两类。内肽酶作用于蛋白质多肽链的内部,可以在特定肽键处切割,产生多个较小的肽段;外肽酶则作用于蛋白质或多肽链的末端,逐个将肽键水解,释放出单个的氨基酸。按其作用活性中心,又可将蛋白酶分为丝氨酸蛋白酶、半胱氨酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶和金属蛋白酶等。
为了保护蛋白,降低蛋白降解的风险,在实验中抑制蛋白酶的活性便是首要的任务,因此蛋白酶抑制剂身担重任。
CCK-8 (Cell Counting Kit-8) 的有效成分是 WST-8 (2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑单钠盐) ,是一种类似于 MTT (Thiazolyl Blue) 的化合物,它在电子耦合试剂 1-Methoxy PMS 存在条件下,可被线粒体内的脱氢酶还原为甲瓒产物 Formazan (橙色,具有高度水溶性) ,而生成的 Formazan 数量与活细胞数量成正比。