信号通路，模型构建

在微生物检测实验中，菌落计数是一项基础而重要的工作。无论是食品安全、药品质控，还是生物科研、环境监测及医疗卫生领域，随着检测任务不断增加，培养皿计数工作量也日益提升。

坏死性凋亡（necroptosis）是不依赖caspase、基因调控的裂解型程序性细胞死亡，凋亡通路受阻时启动，兼具坏死与程序性死亡特征。经典通路核心轴为RIPK1-RIPK3-MLKL：TNF、TLR配体、胞内核酸感受器ZBP1可激活通路，caspase-8失活后RIPK1/RIPK3组装坏死小体，RIPK3磷酸化MLKL使其寡聚并转运至细胞膜打孔，细胞破裂释放大量促炎DAMPs诱发炎症。该通路在免疫细胞高表达，参与缺血损伤、炎症肠病、神经退行性病变；在肿瘤中呈双重作用：放化疗诱导急性坏死性凋亡可激活抗肿瘤免疫，慢性持续激活则构建免疫抑制微环境、促进肿瘤转移，RIPK1/MLKL抑制剂是炎症与肿瘤潜在靶向药物。^[1-2]

肺动脉高压（pulmonary hypertension，PH）以肺血管重构、阻力升高、右心室负荷增加、右心衰死亡为核心特征，暂无根治药物。病因复杂，涵盖遗传、缺氧、左心病变、毒素、炎症等多因素，动物模型是解析发病机制核心工具。目前，构建PH动物模型的方法包括野百合碱（MCT）诱导、慢性缺氧诱导、司马沙尼（SU5416）联合慢性缺氧诱导（SuHx）、基因编辑、肺动脉结扎等。不同造模方法各有优缺点，研究需依实验目的选择多种模型交叉验证以提升转化价值。^[1-2]

在细胞培养实验中，细胞复苏是连接冻存与培养的重要环节。很多实验人员都有这样的经验：将冻存细胞从液氮中取出后，在快速复苏过程中，往往不会等到冻存管内的冰块完全融化，而是在仍保留少量冰晶时结束复温。对于初学者来说，这似乎有些难以理解：既然是解冻，为什么不让冰晶完全消失？

表观遗传学（epigenetics）是不改变DNA碱基序列，却能引发可遗传基因表达改变的调控方式，主要包括DNA甲基化、组蛋白修饰与非编码RNA调控三类机制。非编码RNA（noncoding RNA，ncRNA）可直接结合基因组区域、RNA或蛋白复合物，调控分子互作与细胞功能。依据长度可分为微小RNA（miRNA）、长链非编码RNA（lncRNA）、环状RNA（circRNA）等，通过分子海绵、支架等多种模式参与转录及转录后调控。ncRNA表达异常会扰乱表观遗传稳态，诱发肿瘤、代谢病、心血管疾病等多种疾病，是表观靶向药物研发的重要靶点。^[1-2]

各位科研人，久等了！

上场直播 “直击WB实操（上）” 我们详细拆解了配胶、上样、转膜的每一步，很多同学表示“学到了”！

糖尿病是一种多因素慢性疾病，由多种遗传和/或环境因素诱发。世界卫生组织（WHO）全球糖尿病报告显示，自1980年以来，糖尿病患者人数几乎翻了四倍，达到4.22亿，预计到2045年将增加到6.93亿。该病的特征是血糖水平偏高，原因是胰岛素浓度不足或活性不足。【1】

表观遗传学（epigenetics）是不改变DNA碱基序列，却能引发可遗传基因表达改变的调控方式，主要包括DNA甲基化、组蛋白修饰与非编码RNA调控三类机制。其中组蛋白修饰是在相关酶的催化下，发生甲基化、乙酰化、磷酸化、泛素化等共价修饰的生物学过程。组蛋白修饰通过改变组蛋白与双链DNA的结合亲和力，调控染色质呈松散或凝集状态，同时还可影响转录因子与结构基因启动子的结合能力，进而实现基因表达调控。依托组蛋白修饰可逆特性，HDAC、EZH2等靶向抑制剂已批准上市，成为表观靶向药物研发的重要方向。^[1-3]

各位实验台前的战友们：

是不是一提起Western Blot，脑海里就闪过：

❓ 配胶为什么总有气泡？

❓ 上样怎么老是歪歪扭扭？

❓ 转膜后条带时有时无，像“玄学”？

❓ 明明按步骤做了，结果总不尽人意？