D-Luciferin sodium 是萤光素酶的天然底物，可催化生物发光昆虫产生光。该反应产生的 560 nm 化学发光在几秒钟内达到峰值，当底物荧光素过量时，光输出与荧光素酶浓度成正比。荧光素酶 (luc) 基因是研究和活性分子筛选的常用报告基因。化学发光技术实际上是无背景的，使得 luc 报告基因成为检测低水平基因表达的理想选择。在标准荧光计数仪中可以可靠地测量到 0.02 pg 的荧光素酶。除了用于基因表达的外，荧光素酶还用于 ATP 的检测。

D-Luciferin sodium 是酶荧光素酶 (Luc) 的天然底物，其催化萤火虫的典型黄绿色光的产生 ^[1]。

使用萤火虫荧光素酶 (Fluc) 作为报告基因和 D-Luciferin sodium 作为底物的生物发光成像 (BLI) 是目前使用最广泛的技术。将总信号强度相对于 D-Luciferin sodium 注射后的时间作图，以产生时间 - 强度曲线。除了峰值信号之外，在 D-Luciferin sodium 注射后的固定时间点 (5、10、15 和 20 分钟) 的信号被确定为峰值信号的替代。给定时间 - 强度曲线中的信号针对曲线中的峰值信号进行归一化，以表示 D-Luciferin sodium 注射后的时间变化模式 ^[2]。

操作指南（以下是 SparkJade 的推荐方案。本方案仅提供指导原则，请根据您的具体实验进行修改)

1. 操作前注意事项 (仅供参考)
1.1 D-Luciferin sodium salt 在 100 mM 的水性缓冲液 (pH 6.1-6.5) 中易于溶解。储备溶液可在不含 ATP 的水中制成，并储存在 -20°C 的温度下，以防光线照射。游离酸必须用适当的碱中和以溶解。在较高的 pH 值下，D-Luciferin sodium salt  经历碱催化的脱氢脲醛生成，以及外消旋成 L-异构体。
1.2 D-Luciferin sodium salt 可用于任何现有的报告基因检测或 ATP 检测系统。
1.3 如果检测 ATP，需要戴手套和使用不含 ATP 的容器，尽量减少所有可能的 ATP 污染源。只使用无菌的不含 ATP 的水和试剂。所有试剂制剂使用蒸压水。
2. 实验操作 (仅供参考)
2.1 体外成像实验示例
a) 在无菌水中制备 100 mM (100-200X) D-Luciferin sodium salt 储备溶液 拌匀。立即使用或一次性等份使用，并在 -20°C 下储存，避免冻融循环，避免暴露在阳光下。
b) 在预热过的组织培养液中配制 0.5-1 mM D-Luciferin sodium salt 工作液
c) 除去细胞中的培养基。
d) 在细胞中加入 D-Luciferin sodium salt 工作液，成像前 37°C 孵育细胞 5-10 分钟。
2.2 体内成像实验示例
a) 在 DPBS 中制备 15 mg/mL D-Luciferin sodium salt 储备溶液，不含 Mg²⁺ 和 Ca²⁺ 拌匀。
b) 过滤器通过 0.2 μm 过滤器对溶液进行灭菌。立即使用，或一次性等份使用，并在 -20°C 下储存，避免冻融循环，避免暴露在阳光下。
c) 成像前 10-15 分钟，以 150 mg/kg (或 10 μL/g D-Luciferin sodium salt 储备溶液) 的动物体重腹腔注射 D-Luciferin sodium salt 。
注：应为每个动物模型进行 D-Luciferin sodium salt 动力学研究，以确定峰值信号时间。
2.3 基因检测实验示例
a) 在无菌水中制备100 mM D-Luciferin sodium salt 储备溶液。立即使用，或一次性等份使用，并在 -20°C 下储存，避免冻融循环，避免暴露在阳光下。
b) 在 25 mM tricine 缓冲液 (pH 7.8) 中制备含有 3 mM ATP、1 mM DTT 和 15 mM MgSO₄ 的 1 mM D-Luciferin sodium salt 工作溶液。
c) 用移液管将 5-10 μL 细胞裂解液移到微孔板中。使用不含裂解物的裂解试剂或缓冲液作为空白对照。
d) 根据说明，使用 D-Luciferin sodium salt 工作溶液为光度计注入底部。
e) 立即注入 200 μL D-Luciferin sodium salt 工作溶液，结合时间为 10 s。