Coelenteramine 400a (Coelenterazine 400a)，一种 Coelenterazine 的衍生物，是海肾荧光素酶 (RLuc) 的底物。在 Coelenteramine 400a 的存在下，RLuc 可以发出 395 nm 的蓝光。Coelenterazine 400a 通过取代亚甲基桥的硫和氧杂原子导致 Rluc 的生物发光反应发生色变。Coelenterazine 400a 提供了更高的信号分辨率，可用于生物发光共振能量转移 (BRET) 研究。该产品在溶液状态不稳定，建议现用现配，并在短期内尽快用完。
| 规格 | 价格 | 货期 |
|---|---|---|
| 500 μg | ¥ 600.00 | |
| 1 mg | ¥ 940.00 | |
| 5 mg | ¥ 2100.00 | |
| 10 mg | ¥ 3380.00 |
| Cas No. |
70217-82-2
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|---|---|---|---|
| 分子式 |
C26H21N3O
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| 分子量 |
391.46
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| 储存方式 (自收到货起) |
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| 储存注意事项 |
1. 粉末最好使用惰性气体 (氮气或氩气)，在密封良好的塑料管中避光保存于-20℃，长期保存于-80℃。管内即使存在少量空气，可能造成 Coelenteramine 400a 氧化失活，造成在不同试验间的量化分析结果无法比较。 2. 本品接触空气，水或者任何氧化试剂会不稳定。 |
| 生物活性 |
Coelenteramine 400a (Coelenterazine 400a)，一种 Coelenterazine 的衍生物，是海肾荧光素酶 (RLuc) 的底物。在 Coelenteramine 400a 的存在下，RLuc 可以发出 395 nm 的蓝光。Coelenterazine 400a 通过取代亚甲基桥的硫和氧杂原子导致 Rluc 的生物发光反应发生色变。Coelenterazine 400a 提供了更高的信号分辨率，可用于生物发光共振能量转移 (BRET) 研究。该产品在溶液状态不稳定，建议现用现配，并在短期内尽快用完。 |
|---|---|
| 产品类别 |
染料/荧光试剂；生化试剂
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| 使用方法 |
操作指南 (以下是 SparkJade 的推荐方案。本方案仅提供指导原则，请根据您的具体实验进行修改) 1. Coelenteramine 400a 工作液的配制 1.1 Coelenteramine 400a 溶解特性：不溶于水。目前毒性最低的溶剂是 100% 乙醇，可配制浓度为 0.1-1 mg/mL。加入 pH 低于 7.0 的酸性缓冲液 (碱性 pH 会快速降解底物) 稀释成低浓度工作液。切忌溶于 DMSO。 1.2 Coelenteramine 400a 工作液的配制：称取 500 μg 的 Coelenteramine 400a 粉末溶解于 500 μL 乙醇 (或甲醇) 中配置成浓度为 1 mg/mL 的母液。在使用时需将母液用合适的缓冲液 (比如 PBS) 稀释成需要浓度的工作液。比如常用的工作液浓度是 100 μM，可使用 391.5 μL 的 1 mg/mL 的母液用 PBS 稀释到 10 mL，得到一个 100 μM 的溶液。 建议工作液溶液现配现用！体外实验，需将稀释后的工作液室温放置 20-30 分钟，方可稳定工作。
2. BRET 生物发光共振能量转移（可根据具体实验发生变动） 本步骤以 Rluc 的融合蛋白作为能量供体，YFP 的融合蛋白作为能量受体，两者同时电转化进入细胞，并通过加载 Coelenteramine 400a 底物来启动氧化反应，通过分析两者 BRET 信号来研究两个蛋白之间的相互作用 [1]。 2.1 按照正常流程将能表达两个融合蛋白的质粒，按照 3:1 的比例 (YFP: Rluc) 共电转染进入细胞。 2.2 转染后 24 小时进行 BRET 信号的检测。吸去培养液 (留约 30 μL) 后，将 96 孔板放到荧光酶标仪上。 2.3 至少在测定前 15 分钟准备 Coelenteramine 400a 工作液。 2.4 用超纯水清洗注射泵后，让泵开始自动吸取配制好的 Coelenteramine 400a 工作液，按照每孔 70 µL工作液的量顺序加入，使得每孔中底物的终浓度为 30 µM。进样结束后，孵育 2 分钟。之后立即进行双波长荧光信号读数，即 Rluc 信号 (485 nm) 和 BRET 信号 (535 nm) 。 |
| 参考文献 |
| 体外 (25°C） | DMSO (吸湿的 DMSO 对产品的溶解度有显著影响， 请使用新开封的 DMSO) |
DMSO 会对其活性造成损伤，不建议 DMSO 溶解
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| Ethanol |
0.5 mg/mL (1.28 mM) 50℃水浴；超声
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| 制备储备液 | 浓度 溶液体积 质量 | 1 mg | 5 mg | 10 mg |
| 1 mM | 2.5545 mL | 12.7727 mL | 25.5454 mL | |
| 5 mM | 0.5109 mL | 2.5545 mL | 5.1091 mL | |
| 10 mM | 0.2555 mL | 1.2773 mL | 2.5545 mL | |
| 50 mM | 0.0511 mL | 0.2555 mL | 0.5109 mL | |
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备注：请根据产品在不同溶剂中的溶解度选择合适的溶剂配制储备液。该产品在溶液状态不稳定，建议现配现用，在短期内尽快用完。 |
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| 1：一般建议：为了使其更好的溶解，请用 37℃ 加热试管并在超声波、水浴中震动片刻。不同厂家不同批次产品溶解度各有差异，仅做参考。 |
| 2：运输条件：蓝冰运输或根据您的需求运输。 |
| 3: SparkJade 小分子产品为非无菌包装，若用于细胞培养，请提前做预处理，除去热原细菌，否则会导致染菌。 |
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4：部分产品 SparkJade 仅能提供部分信息，思科捷不保证所提供信息的权威性，以上数据仅供参考交流研究之用。 |
| 5: 为更好的适应实验需求和市场情况，SparkJade 部分产品陆续更新中，最新产品信息以官网为准，不便之处，敬请谅解！ |
| 6：实验结果可由多种因素影响，相关处理只限于产品本身，不涉及其他赔偿。 |
| 7： SparkJade 的所有产品仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用。 |
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