D-Luciferin Potassium Salt 是萤火虫萤光素酶 (firefly luciferase) 最常用的底物，在 ATP、镁离子和氧气存在的条件下，通过萤火虫萤光素酶的作用进行氧化脱羧反应发出波长约为 560 nm 的蓝绿色生物萤光 (bioluminescence)。

D-Luciferin Potassium Salt 广泛应用于基于萤火虫萤光素酶的报告基因检测，包括表达萤火虫萤光素酶的细胞和组织样品裂解液的检测，以及表达萤火虫萤光素酶动物的活体成像分析 (In Vivo Bioluminescence Imaging) 和培养细胞的体外生物发光分析 (In Vitro Bioluminescence Analysis)。

目前市场上有三种产品形式，D-Luciferin (游离酸)、D-Luciferin sodium 以及 D-Luciferin Potassium Salt。这三种产品主要的差别在于溶解特性上。D-Luciferin (游离酸) 水溶性以及缓冲体系的溶解性都很弱，除非溶于弱碱如 NaOH 和 KOH 溶液，但钠盐和钾盐形式的 D-Luciferin 能够非常容易且快速的溶入水或者缓冲液中，使用方便，溶剂无毒性，特别适合体内实验。配成液体后的这三种产品，在绝大多数的应用上都没有实质性的差别。

染料/荧光试剂

D-luciferin 是荧光素酶 (Luc) 的天然底物，它催化萤火虫产生典型的黄绿光。与 D-luciferin 及其衍生物或类似物的合成有关的综述中，这些衍生物或类似物是来自美国萤火虫的荧光素酶的底物或抑制剂，该酶更常用于体外和光学成像技术 ^[1]。

以萤火虫荧光素酶 (Luc) 为报告基因，D-Luciferin 为底物的生物发光成像 (BLI) 是目前应用最广泛的技术。将总信号强度与 D-Luciferin 注射后的时间绘制成时间-强度曲线。除了峰值信号，D-Luciferin 注射后的这些固定的时间点 (5、10、15 和 20 分钟) 也被确定为峰值信号的替代点。将给定时间-强度曲线中的信号归一化为曲线中的峰值信号，以表示 D-Luciferin 注射后的时间变化模式 ^[2]。

操作指南 (以下是 SparkJade 的推荐方案。本方案仅提供指导原则，请根据您的具体实验进行修改)

1. 体外生物发光检测 (仅供参考)

(1) 用蒸馏水溶解 D-Luciferin Potassium Salt，配制成 100 mM 的储存液 (200×；浓度 30 mg/mL)。混匀后立即使用或分装于 -20℃ 或 -80℃ 冻存，避免反复冻融。

(2) 用预热好的组织培养基 1:200 稀释储存液，配制工作液 (终浓度 150 µg/mL)。

(3) 去除培养细胞的培养基直至无残留。

(4) 待图像分析前，向细胞内添加 1× 荧光素工作液，然后进行图像分析 (或者细胞放在 37℃ 短时间孵育后检测可增强信号)。

2. 活体成像分析（仅供参考）

(1) 用无菌的 DPBS ( 不含 Mg²⁺ 和 Ca²⁺) 配制 D-Luciferin Potassium Salt 工作液 (15 mg/mL)，0.2 μm 滤膜过滤除菌。混匀后立即使用或分装于 -20℃ 或 -80℃ 冻存，避免反复冻融。一旦使用，放到 4℃ 解冻，保持冰冷且避光。

(2) 注射量取决于注射方式，具体如下：

(3) 注射入体内 10-20 分钟 (待光信号达到最强稳定平台期)，再进行成像分析。

【注】：注射方式、动物类型以及体重等都会影响信号的发射，因此建议每次实验都要做荧光素酶动力学曲线，确定最佳信号平台期和最佳的检测时间。