ML162 是一种 GPX4 (谷胱甘肽过氧化物酶 4) 抑制剂，对突变型 RAS 癌基因表达细胞系具有选择性致死性，对表达 HRAS^G12V 和野生型 BJ 成纤维细胞的 IC50 分别为 25 和 578 nM。ML162 可诱导铁死亡 (Ferroptosis)。

Glutathione Peroxidase；Ferroptosis

Metabolic Enzyme/Protease；Apoptosis

Glutathione Peroxidase 4 (GPX4) ^[1]

ML162 对两个表达 HRAS^G12V 的细胞系显示出纳米摩尔效力，对于表达 HRAS^G12V 和野生型 BJ 成纤维细胞，其 IC50 值分别为 25 nM 和 578 nM ^[1]。

ML162 (8 μM；24 小时) 处理可增加化学抗性 HN3R 和 HN3-rslR 细胞中 p62 和 Nrf2 的表达，使 Keap1 失活，并增加 phospho-PERK-ATF4-SESN2 通路的表达 ^[2]。

ML162 不同程度地诱导头颈癌 (HNC) 细胞死亡，亲本 HN3 细胞更敏感，顺铂耐药 (HN3R) 和获得性 RSL3 耐药 (HN3-rslR) 细胞敏感性较低 ^[2]。

通过代谢组学分析发现，ML162 处理癌细胞可导致氨甲酰天冬氨酸 (C-Asp，嘧啶生物合成的中间体) 的降低，并伴有尿苷 (uridine，嘧啶生物合成的最终产物) 的累积 ^[3]。

将 GPX4 抑制剂 ML162 与泊马度胺共价结合，形成 PROTAC 分子 dGPX4。在研究 dGPX4 对 HT-1080 细胞活力的研究中，观察到细胞中活性氧 (ROS) 水平以药物浓度依赖的方式提高，这是细胞铁死亡的典型特征，细胞半数抑制浓度 (IC50) 为 300 nM。相比之下，直接以 ML162 作用于 HT-1080 细胞的 IC50 为 1.5 μM，这表明降解 GPX4 可以实现更强大的铁死亡诱导效率。dGPX4 作为降解 GPX4 的首个概念验证，作用细胞类型广泛，成功将 ML162 诱导铁死亡的效力提高了 5 倍 ^[4]。

将 GPX4 抑制剂 ML162 与泊马度胺共价结合，形成 PROTAC 分子 dGPX4。 然后又设计了一种脂质纳米颗粒 (LNP)，实现 dGPX4 的封装与控释。该 LNP 是由 ROS 降解的 401-TK-12 构成，肿瘤细胞中上调的 ROS 可以触发 401-TK-12 的降解，导致 dGPX4 在肿瘤细胞中的特异性释放。dGPX4 经 401-TK-12 封装后溶解性提高，同时可以利用高通透性和滞留效应 (EPR) 被动靶向肿瘤组织。HT-1080 异种移植模型中，经 401-TK-12 LNP 递送的 dGPX4 将小鼠肿瘤体积减小到 20% 水平。而游离的 PROTAC 分子尽管在体内显示出一定的肿瘤抑制作用，研发发现小鼠肾、肝功能受损，体重减轻，而经 401-TK-12 LNP 递送的 dGPX4 未观察到上述现象 ^[4]。