操作指南(以下是 SparkJade 的推荐方案。本方案仅提供指导原则,请根据您的具体实验进行修改)
储备液的制备
将 1 mg BODIPY 581/591 C11 溶解在 0.1983 mL DMSO 中以获得 10 mM BODIPY 581/591 C11。
1.2 BODIPY 581/591 C11工作液的制备
在无血清细胞培养中稀释储备液培养基或 PBS 取 2-10 μM BODIPY 581/591 C11 工作液。
【注】:请根据实际情况调整 BODIPY 581/591 C11 工作液的浓度。
细胞染色
1. 悬浮细胞:
1.1 4℃,1000g 离心 3-5 分钟,弃上清。PBS 洗涤 2 次,每次 5 分钟。
1.2 加入 1 mL BODIPY 581/591 C11 工作液,室温孵育 10-30 分钟,不同的细胞最佳孵育时间不同。
1.3 4℃,400 g 离心 3-4 分钟,弃上清。
1.4 PBS 洗涤 2 次,每次 5 分钟。
1.5 用无血清细胞培养基或 PBS 重悬细胞,荧光显微镜或流式细胞仪。
2. 贴壁细胞:
2.1 对于 6 孔板的一个孔,吸除培养液,根据具体实验如有必要可以用 PBS 或其它适当溶液洗涤细胞一次。如果使用其它的多孔板,各种试剂的用量需要相应按比例调整。
2.2 加入 1 ml BODIPY 581/591 C11 染色工作液。细胞培养箱中 37ºC 孵育10-30 分钟,不同的细胞最佳孵育时间不同。
2.3. 37ºC 孵育结束后,吸除上清,用 PBS 洗涤 2 次。
2.4 用无血清细胞培养基或 PBS 重悬细胞,荧光显微镜或流式细胞仪。
【注】:对于贴壁细胞,如果希望采用流式细胞仪检测,可以先消化并收集细胞,重悬后参考悬浮细胞的检测方法。
注意事项
1. 建议储备液避光保存在 -20℃ 或 -80℃,避免反复冻融周期。
2. 请根据实际情况调整 BODIPY 581/591 C11 工作液的浓度。
3. 本品仅供研发使用,不得用于药物、家庭或其他用途。
4. 为了您的安全和健康,请穿白大褂,戴一次性手套操作。