如咨询分子生物学试剂请点击www.sparkjade.com 请致电 400-694-7688 或联系 在线客服
010M07,0E06010A01
您当前的位置：
  1. 首页
  2. 信号通路
  3. Others
  4. Others
3X FLAG peptide
目录号 : SJ-BP0266 纯度：98.48%

3X FLAG peptide 是带有 FLAG 标签的多肽，包含三个重复的 Asp-Tyr-Lys-Xaa-Xaa-Asp 基序。3X FLAG peptide 可用于蛋白分离纯化，和目标蛋白竞争性洗脱。

CAS No. :402750-12-3
SparkJade所售产品仅用于科学研究（非临床研究），不向任何个人提供产品和服务。
规格 价格 货期
1 mg ¥  420.00
5 mg ¥  820.00
10 mg ¥  1500.00
25 mg ¥  3000.00
大包装询价
400-694-7688 sales@sparkjade.com tech@sparkjade.com

SparkJade小分子产品文献引用

Cas No.
402750-12-3
分子式
C120H169N31O49S
分子量
2861.87
储存方式
(自收到货起)
 Pure form  -80℃   2 年

 In solvent

建议分装储备液，避免反复冻融！

  -80℃   6 个月
 -20℃   1 年  -20℃   1 个月
储存注意事项
密封，防潮
生物活性
3X FLAG peptide 是带有 FLAG 标签的多肽，包含三个重复的 Asp-Tyr-Lys-Xaa-Xaa-Asp 基序。3X FLAG peptide 可用于蛋白分离纯化，和目标蛋白竞争性洗脱。
产品类别
多肽
体外研究 (In Vitro)

1. 通过 3X FLAG peptide 竞争纯化 FLAG 标签蛋白 [1]
(1) 质粒转染：将 FLAG 标记的 mIRS-1、hIRS-1 或其突变体的质粒转染到 293 T 细胞中，转染时间为 2 天。
(2) 收集细胞：在 4 °C 下以 14,000 rpm 离心 10 分钟收获细胞，并用 HEPES 缓冲液 (150 mM NaCl、50 mM HEPES、pH 7.4、5 mM EDTA、1% (w/v) 脱氧胆酸钠、1% (v/v) Triton X-100、0.2% 氟化钠、0.1% 原钒酸钠和蛋白酶抑制剂混合物) 裂解细胞。
(3) 利用 Anti-FLAG 磁珠进行蛋白分离与纯化：在细胞裂解液中加入Anti-Flag 磁珠/Anti-c-Myc 磁珠 (1 μm)，在室温下孵育 2 小时或在 4 °C 下孵育过夜。随后用洗涤缓冲液进行洗涤，并用含有 1 mg/mL 3X FLAG 的缓冲液进行洗脱。最后使用增加柱进行凝胶过滤以进一步纯化上清液，该柱使用储存缓冲液平衡。所有纯化的蛋白质均通过离心过滤浓缩，并分装储存在 -80 °C 下。
(4) 蛋白定量与验证：使用 ND-2000 NanoDrop 分光光度计以 OD 280 对纯化的蛋白进行定量，并通过考马斯亮蓝染色进行验证。
2. 通过 3X FLAG peptide 进行 Co-IP 和 co-IP–MS 分析 [2]
(1) 将细胞裂解液以 13300 rpm 在 4 °C 离心 15 分钟，去除完整细胞。
(2) 上清液用对照免疫球蛋白 G (IgG) 或一抗在免疫沉淀缓冲液 (150 mM NaCl、20 mM HEPES、pH 7.4、1% Triton X-100、12.5 mM β-甘油磷酸盐、1.5 mM MgCl2、2 mM EGTA，含有磷酸酶和蛋白酶抑制剂) 中过夜孵育，然后在 4 °C 下与 20 μL 重悬的 A/G 蛋白珠孵育 2 小时，以沉淀结合的蛋白质。
(3) 对于连续免疫沉淀，在 4 °C 下用 5 倍凝胶体积的 3X FLAG 洗脱溶液 (终浓度 150 μg/mL) 孵育 2 小时，从珠粒中洗脱结合的蛋白质，然后在 4 °C 下用二抗免疫沉淀过夜。珠子在 4 °C 下以 1000 g 离心 5 分钟，以去除上清液，用免疫沉淀缓冲液洗涤 4 次，并在 95 °C 下煮沸 20 分钟。
(4) 样品在 SDS-PAGE 凝胶上运行，然后染色 (Bio-Rad)。随后，切下胶带，脱色，胰蛋白酶消化，并进行 MS 分析，使用液相色谱-MS 确定个别蛋白质。
参考文献

[1]. Gao XK, et al. Phase separation of insulin receptor substrate 1 drives the formation of insulin/IGF-1 signalosomes. Cell Discov. 2022 Jun 28;8(1):60.  

[2]. Cong M, et al. MTSS1 suppresses mammary tumor-initiating cells by enhancing RBCK1-mediated p65 ubiquitination. Nat Cancer. 2020 Feb;1(2):222-234.

溶解度数据【动物实验需要先查阅文献，确认是否需要添加合适比例助溶剂来帮助溶解】

体外 (25°C） DMSO (吸湿的 DMSO 对产品的溶解度有显著影响， 请使用新开封的 DMSO)
10 mg/mL (3.49 mM) 50℃水浴；超声
Others
0.01M HCl: 40 mg/mL (13.98 mM)

制备储备液

制备储备液 浓度 溶液体积 质量 1 mg 5 mg 10 mg
1 mM 0.3494 mL 1.7471 mL 3.4942 mL
5 mM 0.0699 mL 0.3494 mL 0.6988 mL
10 mM 0.0349 mL 0.1747 mL 0.3494 mL
50 mM 0.0070 mL 0.0349 mL 0.0699 mL

备注：请根据产品在不同溶剂中的溶解度选择合适的溶剂配制储备液；一旦配成溶液，请分装保存，避免反复冻融造成的产品失效。溶液超过 3 个月建议复检，以免影响活性。

纯度： 98.48%

SDS
1：一般建议：为了使其更好的溶解，请用 37℃ 加热试管并在超声波、水浴中震动片刻。不同厂家不同批次产品溶解度各有差异，仅做参考。
2：运输条件：蓝冰运输或根据您的需求运输。
3:  SparkJade 小分子产品为非无菌包装，若用于细胞培养，请提前做预处理，除去热原细菌，否则会导致染菌。

4：部分产品 SparkJade 仅能提供部分信息，思科捷不保证所提供信息的权威性，以上数据仅供参考交流研究之用。
5: 为更好的适应实验需求和市场情况，SparkJade 部分产品陆续更新中，最新产品信息以官网为准，不便之处，敬请谅解！
6：实验结果可由多种因素影响，相关处理只限于产品本身，不涉及其他赔偿。
7： SparkJade 的所有产品仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用。

相关产品

The molarity calculator equation
Mass (g) = Concentration (mol/L) × Volume (L) × Molecular Weight (g/mol)
计算 重置
The dilution calculator equation
Concentration (start) × Volume (start) = Concentration (final) × Volume (final)
This equation is commonly abbreviated as: C1V1 = C2V2
计算 重置
Molecular weight calculator
Enter the chemical formula of the compound to calculate its molar mass and elemental composition
g/mol
计算 重置
Animal experiment calculation converter
第一步：请输入基本实验信息（考虑到实验过程中的损耗，建议多配一只动物的药量）
第二步：请输入动物体内配方组成（配方适用于不溶于水的药物；不同批次药物配方比例不同，请联系SparkJade为您提供正确的澄清溶液配方）
+
+
+
计算 重置

计算结果:

工作液浓度： mg/ml；

DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL，

体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。

1. 首先保证母液是澄清的；
           2. 一定要按照顺序依次将溶剂加入，进行下一步操作之前必须保证上一步操作得到的是澄清的溶液，可采用涡旋、超声或水浴加热等物理方法助溶。

在线留言
本网站销售的所有产品仅用于工业应用或者科学研究等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用。
关注我们
微信公众号
小红书

Copyright  2019 山东思科捷生物技术有限公司 All right reserved      鲁ICP备2022004154号-2     鲁公网安备37011202002432号
思科捷官网 浩赛官网