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Western Blot常见3种检测方法优缺点及如何选择？

蛋白质印迹（Western Blot, WB）又称为免疫印迹（Immunoblot），是利用SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）将样品中分子量大小不同的蛋白分开，然后通过电转移的方法将凝胶中的蛋白转移到固相膜上，再利用抗原、抗体的特异性结合反应，特殊的抗体标记技术以及相应的检测方法，进而对目的蛋白进行定性、相对定量检测的技术。

蛋白质印迹（Western Blot, WB）

又称为免疫印迹（Immunoblot），是利用SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）将样品中分子量大小不同的蛋白分开，然后通过电转移的方法将凝胶中的蛋白转移到固相膜上，再利用抗原、抗体的特异性结合反应，特殊的抗体标记技术以及相应的检测方法，进而对目的蛋白进行定性、相对定量检测的技术。

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Nuclear factor kappa B (NF-κB)信号通路作为真核细胞中的核心信号通路，广泛参与炎症反应、免疫应答、细胞增殖、分化与凋亡等多种生物学过程。其中NF-κB是一类转录因子家族，包含RelA、RelB、c-Rel、p50和p52，以同源或异源二聚体形式存在，均含Rel同源结构域，可实现二聚化、核定位、DNA结合及与抑制蛋白IκB相互作用。

Hedgehog（Hh）信号通路是调控动物发育与组织稳态的关键通路，核心组件包括分泌型配体Hh（Shh、Ihh、Dhh）、十二次跨膜受体Patched（PTCH1/2）、七次跨膜共受体Smoothened（SMO）及Gli转录因子（Gli1/2/3）。正常状态下，PTCH抑制SMO活性，通路处于静息；当Hh配体结合PTCH后，SMO抑制解除，激活Gli家族转录因子，调控细胞分化、增殖及干细胞维持。

蛋白降解靶向嵌合体（PROTACs）作为创新药物研发技术，为生物医药领域带来突破性进展。传统小分子药物常受限于靶蛋白“难成药”困境，约80%人类蛋白缺乏可结合的活性口袋，难以被有效抑制。而PROTACs凭借“双功能嵌合”设计，由靶蛋白结合配体、E3泛素连接酶结合配体及连接子组成，借助细胞内天然的泛素-蛋白酶体系统（UPS）发挥作用：先形成“靶蛋白-PROTACs-E3连接酶”三元复合物，驱动靶蛋白泛素化标记，进而被蛋白酶体识别降解，且PROTACs自身可循环参与后续降解过程。目前，PROTACs在抗肿瘤、自身免疫性疾病等领域展现出广阔应用前景，众多相关分子已进入临床试验阶段^[1-2]。