Cre-ERT2小鼠表达一种融合蛋白,由Cre重组酶与突变型雌激素受体配体结合区(ERT)组成。在无他莫昔芬(Tamoxifen)时,Cre-ERT2因与细胞质抑制性复合物结合而无活性;当给予他莫昔芬后,他莫昔芬在肝脏转化为活性代谢物4-羟基他莫昔芬(4-Hydroxytamoxifen,4-OHT后者与ERT结合,促使Cre-ERT2进入细胞核,激活Cre重组酶功能。对于短期和即时效应研究或需要避免肝脏对他莫昔芬进行转化的情况,可直接使用4-OHT[1,2]。 [1] Inducible Cre mice. Methods Mol Biol. 2009; 530: 343-63. [2] Tamoxifen administration to mice. Cold Spring Harb Protoc. 2015 Mar 2; 2015(3): 269-71. 药物溶解: Tamoxifen:用玉米油溶解至20mg/mL,37℃摇晃过夜。可以使用超声、涡旋加速其混悬。他莫昔芬对光敏感,在制备和储存过程中需要注意避光处理。 4-Hydroxytamoxifen:先用乙醇溶解至100 mg/mL,再用玉米油稀释5倍,至20 mg/mL。
注意点: A. 他莫昔芬、4-OHT溶解后应分装并进行冷冻保存。使用前,解冻所需的分装液并使其达到室温,或最好将其加热至接近小鼠体温的温度; B. 他莫昔芬注射完成停药后,需要继续饲养7天,再安排后续实验; C. 对照组小鼠需要给对应的药物溶剂,例如:玉米油; D. 未给药处理的小鼠需要和给药处理的小鼠分开饲养。
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