操作指南(以下是 SparkJade 的推荐方案。本方案仅提供指导原则,请根据您的具体实验进行修改)
1. Rhodamine 123 工作液的配制
1.1 储备液的配制
取 1 mg Rhodamine 123 溶于 525 μL DMSO中,得到 5 mM 储备液。
1.2 Rhodamine 123 工作液的配制
用无血清细胞培养基或 PBS 稀释储备液,得到 1 -20 μM 工作液。
注意:请根据实际情况调整 Rhodamine 123 工作液的浓度。
2. 细胞染色
2.1 悬浮细胞 (6 孔板)
a. 1000g 4℃ 离心 3-5 分钟,弃上清。PBS 洗 2 次,每次 5 分钟。细胞密度为 1×106/mL。
b. 加入 1 mL 工作液,室温孵育 5-30 分钟。
c. 400g 4℃ 离心 3-4 分钟,弃上清。
d. PBS 洗涤 2 次,每次 5 分钟。
e. 重悬细胞用无血清细胞培养基或 PBS。荧光显微镜或流式细胞仪观察。
2.2 贴壁细胞
a. 在无菌盖玻片上培养贴壁细胞。
b. 从培养基中取出盖玻片并吸出多余的培养基。
c . 加入 100 μL 工作液,轻摇使之完全覆盖细胞,然后室温孵育 30-60 分钟。
d. 用培养基洗涤 2 次,每次 5 分钟。荧光显微镜或流式细胞仪观察。
注:若采用流式细胞仪检测,细胞需重悬后再染色。