操作指南(以下是 SparkJade 的推荐方案。本方案仅提供指导原则,请根据您的具体实验进行修改)
1. Rhodamine 6G 工作液的配制
1.1 制备储存液
用 525 μL 无水 DMSO 稀释 1 mg Rhodamine 6G 去配制 5 mM 的储备液。
1.2 工作液的配制
用预热好的无血清细胞培养基或 PBS 稀释储存液,配制成 1-20 μM 的 Rhodamine 6G 工作液。
注:请根据实际情况调整 Rhodamine 6G 工作液浓度,且现用现配。
2. 细胞染色 (悬浮细胞)
2.1 离心收集细胞,加入 PBS 洗涤两次,每次 5 分钟。细胞密度在 1×106/mL。
2.2 加入 1 mL Rhodamine 6G 工作液,室温孵育 30-60 分钟。
2.3 400 g,离心 3-4 分钟,弃去上清。
2.4 加入 PBS 洗涤细胞两次,每次 5 分钟。
2.5 用 1 mL 无血清培养基或 PBS 重悬细胞后,使用荧光显微镜或流式细胞仪进行观察。
3. 细胞染色 (贴壁细胞)
3.1 将贴壁细胞培养于无菌盖玻片上。
3.2 从培养基中移出盖玻片,吸除多余培养基。
3.3 加入 100 μL 染料工作液,轻轻晃动使其完全覆盖细胞,孵育 5-30 分钟。
3.4 吸去染料工作液,用培养基洗 2-3 次,每次 5 分钟 ,使用荧光显微镜或流式细胞仪进行观察。