操作指南 (以下是 SparkJade 的推荐方案。本方案仅提供指导原则,请根据您的具体实验进行修改)
1. 溶液配制
1.1 原液配制
将 ATP-Red 1 溶于 DMSO 中,配制成 5-10 mM 原液。
储存:分装后,置于 -20°C 或 -80°C 避光保存。避免反复冻融。
1.2 工作液配制
用 PBS 或无血清细胞培养基稀释至 1-10 μM (根据实验优化)。
【注】:工作液现配现用,并避光保存。
2.细胞染色 (悬浮细胞)
2.1 离心收集细胞,加入 PBS 洗涤两次,每次 5 分钟。细胞密度在 1×106/mL。
2.2 加入 ATP-Red 1 染料 工作液,终浓度为 5-10 µM。
2.3 室温或 37°C 孵育细胞 15 分钟 (活细胞成像最多可孵育 30 分钟)。
2.4 400 g,离心 3-4 分钟,弃去上清。
2.5 加入 PBS 洗涤细胞两次,每次 5 分钟。
2.6 用无血清培养基或 PBS 重悬细胞后,使用荧光显微镜或流式细胞仪进行观察。
3. 细胞染色 (贴壁细胞)
3.1 将贴壁细胞培养于无菌盖玻片上。
3.2 从培养基中移出盖玻片,吸除多余培养基。
3.3 加入 ATP-Red 1,终浓度为 5-10 µM。
3.4 室温或 37°C 孵育细胞 15 分钟 (活细胞成像最多可孵育 30 分钟)。
3.5 吸去染料工作液,用培养基洗 2-3 次,每次 5 分钟,使用荧光显微镜 (Ex/Em = 510/590 nm) 进行分析。
注:若需要用流式细胞仪检测,需将细胞用胰蛋白酶消化重悬后再进行染色。