Toluidine Blue (Toluidine Blue O) 是一种碱性的醌亚胺染料 (活体染料)，对酸性组织成分有很高的亲和力，可将细胞核染成蓝色，多糖染成紫色。Toluidine Blue 对肥大细胞、粘蛋白和软骨细胞显示异染性。Toluidine Blue 可使植物组织和细胞的不同成分染成不同的颜色。Toluidine Blue 还可作为辅助诊断工具，鉴别恶性病变，如癌症。

操作指南 (以下是 SparkJade 的推荐方案。本方案仅提供指导原则，请根据您的具体实验进行修改)

检测浸润性肥大细胞 ^[1]：
1. 组织处理
1) 将组织样本浸入 10% 缓冲福尔马林中 24 小时。
2) 从固定液中取出组织并放入 70% 酒精中。
3) 石蜡包埋：依次在 70%、85%、95%、100% 乙醇、二甲苯、熔融石蜡中孵育 (30分钟)，并将组织置于石蜡块中。
4) 将石蜡包埋的组织切成 5-7 μm 的切片并置于载玻片上。
5) 使用前将载玻片在 55°C 下烘烤至少 1 小时。
2. 组织染色
1) 将载玻片浸入二甲苯 (或 Histo-Clear) 5 分钟，对石蜡包埋的组织切片进行脱蜡，然后将组织连续浸入 (每次 5 分钟) 100%、95% 和 70% 乙醇，最后 2 分钟浸入蒸馏水中。
2) 将玻片放入 Harris 苏木精溶液中 70 秒。
3) 将载玻片浸入干净的自来水中两到三次，短暂清洗多余的苏木精。在纸巾上轻轻拍打载玻片，除去多余的水。
4) 将载玻片在 70% 酒精中短暂浸泡 3 次，然后用干净的自来水再次清洗 3 分钟。 除去多余的水。
5) 将载玻片放入 Scott 蓝化液中最多一分钟。此步骤可将苏木精转变成细胞核内不溶的蓝色。
6) 在强光显微镜下检查载玻片，确保细胞核正确染色。
7) 用干净的自来水清洗载玻片 3 分钟，并除去多余的水。
8) 将载玻片浸入干净的 ~1.1% Toluidine Blue 溶液中 4 分钟。
9) 用干净的自来水清洗载玻片 3 分钟，并除去多余的水。
10) 将载玻片快速浸入一批 70% 乙醇中 3 次，然后再浸入 5% 伊红溶液中 5 次。
11) 将载玻片连续浸入 70% (2 分钟)、95% (两次，每次 2 分钟) 和 100% 乙醇 (两次，每次 2 分钟)； 通过将载玻片浸入二甲苯 (或 Histo-Clear) (两次，每次 3 分钟) 来结束此步骤。
12) 使用二甲苯封固剂，用干净的盖玻片封固每张载玻片。
13) 让载玻片干燥至少 60 分钟，然后在强光显微镜下进行分析。
【注1】：1.1% Toluidine Blue 溶液：将 1.1 g Toluidine Blue 与 100 mL 0.1 M 醋酸钠缓冲液 (pH 4) 混合。搅拌均匀。 通过滴加 1 M 盐酸将 pH 调节至 2.0-2.5。 染色在25℃、避光下进行。

Toluidine Blue 的应用 ^[2][3]：
1. 结缔组织粘蛋白，尤其是酸性粘蛋白。 组织被染成紫色到红色，而背景被染成蓝色。
2. 由于肝素和组胺的存在，肥大细胞颗粒呈紫色。
3. 淀粉样蛋白呈蓝色，但在偏振光下呈现亮红色双折射。
4. 内分泌细胞颗粒被染成紫色至红色 (染色浓度为 0.01%)。
5. 硫脂呈红棕色或黄色。只有酸性足以引起异染性位移的脂质才会被染色。
6. 白喉棒杆菌含有聚合无机聚磷酸盐颗粒，呈红紫色。
7. 螺杆菌在不同的蓝色背景下染成深蓝色 (染色浓度为 1%)。
8. Toluidine Blue 可用于冷冻切片染色，因为染色过程速度快 (10-20 s) 且细胞清晰度更高。
9. Toluidine Blue 还可将植物的木质素染成蓝绿色，韧皮部染成蓝紫色，植物其余部分染成淡蓝绿色。