HPF (Hydroxyphenyl Fluorescein) 是一种稳定的 ROS 荧光探针染料，比 H2DCFDA 的特异性与稳定性强。HPF 通过羟基自由基，与细胞内过氧亚硝基反应，可产生强烈的绿色荧光。HPF 可应用于荧光显微镜、高通量成像仪、荧光酶标仪或流式细胞仪。其荧光波长：Ex/Em=490/515 nm。
| 规格 | 价格 | 货期 |
|---|---|---|
| 500 μg | ¥ 1860.00 | |
| 1 mg | ¥ 2960.00 |
| Cas No. |
359010-69-8
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|---|---|---|---|---|---|---|
| 分子式 |
C26H16O6
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| 分子量 |
424.40
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| 储存方式 (自收到货起) |
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| 储存注意事项 |
粉末避光保存，粉末溶成母液后也需避光保存。 |
| 生物活性 |
HPF (Hydroxyphenyl Fluorescein) 是一种稳定的 ROS 荧光探针染料，比 H2DCFDA 的特异性与稳定性强。HPF 通过羟基自由基，与细胞内过氧亚硝基反应，可产生强烈的绿色荧光。HPF 可应用于荧光显微镜、高通量成像仪、荧光酶标仪或流式细胞仪。其荧光波长：Ex/Em=490/515 nm。 有许多荧光试剂，例如 2,7-二氯二氢荧光素 (DCDHF)，可用于检测自由基，但是它们容易被光氧化以及许多非自由基氧化剂 (例如过氧化氢) 氧化，因此存在很大的局限性。而 HPF 仅被高活性氧 (hROS) 氧化，例如氢氧自由基，过氧亚硝酸盐和过氧化物酶/ H2O2 系统产生的 hROS。该化合物对其他活性氧 (ROS)，例如次氯酸盐，单线态氧，超氧化物，过氧化氢，一氧化氮和烷基过氧化物几乎没有活性。 HPF 本身没有荧光，当与 hROS (如羟基自由基和过亚硝酸盐) 反应被氧化后，HPF 转换为高荧光分子荧光素，激发/发射最大值分别为 490/515 nm。 |
|---|---|
| 相关靶点 |
Reactive Oxygen Species
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| 作用通路 |
NF-κB Signaling；Immunology/Inflammation；Metabolism
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| 产品类别 |
染料/荧光试剂
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| 体外研究 (In Vitro) |
HPF 是一种细胞可渗透的，光稳定的羟苯基荧光素，可作为检测高活性氧 (hROS) 的高度灵敏的荧光探针 [1]。 由于 HPF 不会与一氧化氮，超氧化物和过氧化氢反应，因此可以与一氧化氮和超氧化物区分开来检测亚硝酸盐。由于 HPF 不与次氯酸盐 (-OCl) 反应，因此可以与检测 -OCl 的 APF (氨基苯基荧光素) 结合使用 [2]。 |
| 体内研究 (In Vivo) |
在 IR (电离辐射) 前 20 分钟，给药小鼠腹腔内注射 HPF 探针 (15 μl，25 μM)。通过 HPF 氧化形式发出的荧光信号来评估 •OH 的积累 [3]。 |
| 激发波长 (Ex) |
490 nm
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| 发射波长 (Em) |
515 nm
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| 使用方法 |
操作指南（以下是 SparkJade 的推荐方案。本方案仅提供指导原则，请根据您的具体实验进行修改） 1. HPF 染色液的配制 (2) 与 DMSO 相比，DMF 的细胞毒性相对较高，建议客户在达到理想荧光效果的前提下使用较低浓度的 HPF，并且实验前验证细胞对相应剂量溶剂的敏感程度； (3) 未使用的储存液分装后在 -20℃ 或 -80°C 避光保存，避免反复冻融。 1.2 工作液的配制 2.1 悬浮细胞：经 4°C、1000g 离心 3-5 分钟，弃去上清液，用 PBS 清洗两次，每次 5 分钟。 贴壁细胞：使用 PBS 清洗两次，加入胰酶消化细胞，消化完成后经 1000g 离心 3-5 分钟。 2.2 加入 HPF 工作溶液重悬细胞，室温避光孵育 5-30 分钟。不同细胞最佳孵育时间不同，请根据具体实验需求自行摸索。 2.3 孵育结束后，经 1000g 离心 5 分钟，去除上清液，加入 PBS 清洗 2-3 次，每次 5 分钟。 2.4 用预温的无血清细胞培养基或 PBS 重悬细胞，通过荧光显微镜或流式细胞术观察。 3. 细胞贴壁染色 3.1 在无菌盖玻片上培养贴壁细胞。 3.2 从培养基中移走盖玻片，吸出过量的培养基，将盖玻片放在潮湿的环境中。 3.3 从盖玻片的一角加入 100 μL 的染料工作液，轻轻晃动使染料均匀覆盖所有细胞。 3.4 室温避光孵育 5-30 分钟。不同细胞最佳孵育时间不同，请根据具体实验需求自行摸索。 3.5 孵育结束后吸弃染料工作液，使用预温的培养液清洗盖玻片 2~3 次。 4. 显微镜检测：HPF 的最大吸收光/发射光波长为 490/515 nm。 |
| 参考文献 |
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| 体外 (25°C） | DMSO (吸湿的 DMSO 对产品的溶解度有显著影响， 请使用新开封的 DMSO) |
125 mg/mL (294.53 mM)
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|---|---|---|
| Others |
DMF: 100 mg/mL (235.63 mM) |
| 制备储备液 | 浓度 溶液体积 质量 | 1 mg | 5 mg | 10 mg |
| 1 mM | 2.3563 mL | 11.7813 mL | 23.5627 mL | |
| 5 mM | 0.4713 mL | 2.3563 mL | 4.7125 mL | |
| 10 mM | 0.2356 mL | 1.1781 mL | 2.3563 mL | |
| 50 mM | 0.0471 mL | 0.2356 mL | 0.4713 mL | |
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备注：请根据产品在不同溶剂中的溶解度选择合适的溶剂配制储备液；一旦配成溶液，请分装保存，避免反复冻融造成的产品失效。溶液超过 3 个月建议复检，以免影响活性。 |
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| 1：一般建议：为了使其更好的溶解，请用 37℃ 加热试管并在超声波、水浴中震动片刻。不同厂家不同批次产品溶解度各有差异，仅做参考。 |
| 2：运输条件：蓝冰运输或根据您的需求运输。 |
| 3: SparkJade 小分子产品为非无菌包装，若用于细胞培养，请提前做预处理，除去热原细菌，否则会导致染菌。 |
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4：部分产品 SparkJade 仅能提供部分信息，思科捷不保证所提供信息的权威性，以上数据仅供参考交流研究之用。 |
| 5: 为更好的适应实验需求和市场情况，SparkJade 部分产品陆续更新中，最新产品信息以官网为准，不便之处，敬请谅解！ |
| 6：实验结果可由多种因素影响，相关处理只限于产品本身，不涉及其他赔偿。 |
| 7： SparkJade 的所有产品仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用。 |
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