Calcein-AM (Calcein Acetoxymethyl Ester) 是一种可渗透进入细胞、常用于测定真核细胞活力或线粒体通透性转换孔 MPTP (Mitochondrial Permeability Transition Pore) 的绿色荧光探针。Calcein-AM 近年来被广泛应用到细胞活性分析实验中。本产品以 2 mg/mL (2 mM) 的 DMSO 溶液提供。

Calcein-AM 是在 Calcein 的基础上增加了乙酰氧基甲酯 (AM) 基团，加强了疏水性，因此能够轻易穿透活细胞膜。Calcein-AM 本身并无荧光，进入细胞后被细胞中内源性酯酶水解生成具有强负电荷的不能通透细胞膜的极性分子钙黄绿素 (Calcein)，从而被滞留在细胞内，而 Calcein 可发出强绿色荧光。与其它同类探针相比，由于 Calcein-AM 的细胞毒性非常低，几乎不会影响细胞功能如细胞增殖或淋巴细胞的趋化性等，而且对 pH 值敏感性低，所以 Calcein-AM 是目前染活细胞的最理想荧光探针之一。
由于死细胞缺乏酯酶，Calcein-AM 仅用于对活细胞的活力测试和短期标记，而核酸红色荧光染料碘化丙啶 PI 由于不能穿透活细胞的细胞膜而只能染色细胞膜完整性被破坏的死细胞，所以 Calcein-AM 常常与 PI 联合使用，对活细胞和死细胞同时进行双重荧光染色。
Calcein-AM 可以应用于大多数的哺乳动物细胞。有报道称 Calcein-AM 也可以用于某些植物细胞如拟南芥 (Arabidopsis) 的根边缘样细胞 (root border-like cells) 及某些酵母如 Pichia anomala 和 Saccharomyces cerevisiae。由于细胞膜组分的原因，Calcein-AM 不能进入活细胞，但却可以进入凋亡早期的寄生虫细胞，从而 Calcein-AM 与 PI 联用用于检测凋亡早期的寄生虫，如 Leishmania。由于真菌和细菌有细胞壁，会阻碍 Calcein 进入细胞，因此 Calcein-AM 不适合用于真菌和细菌。

染料/荧光试剂

肿瘤

Calcein-AM 不依赖于 pH 值，保留性更好，光稳定性更好。此外，Calcein-AM 在细胞内的高水平滞留和掺入后的低水平释放排除了可能的细胞单层标记，并允许其在细胞-细胞相互作用分析中使用。此外，通过酶标荧光仪可以很容易地检测和测量明亮的荧光 ^[1]。

Calcein-AM 是一种高度亲脂性的重要染料，可快速进入活细胞，被细胞内酯酶转化为钙黄绿素，产生强烈的绿色信号 (530 nm)，并被具有完整质膜的细胞保留。Calcein-AM 测定已被用于评估细胞活力，细胞毒性和 TP 定量凋亡 ^[2]。

Calcein-AM 被发现适用于体内研究，因为它对细胞功能没有有害影响，而且确实是细胞活力的标志物 ^[3]。

操作指南 (以下是我们的推荐方案。本方案仅提供指导原则，请根据您的具体实验进行修改)。

1. Calcein-AM 工作液的配制

1.1 查询文献，根据自己的使用要求，再用预热好的无血清细胞培养基或 PBS 稀释储存液将本产品 (2 mM) 稀释制成 1-50 μM 的 Calcein-AM 溶液。

2. 细胞染色 (悬浮细胞)
2.1 离心后收集细胞，加入 PBS 洗涤两次，每次 5 分钟。最终细胞密度在 1×10⁶/mL。
2.2 加入 1 mL Calcein-AM 工作液，37℃ 孵育 30-45 分钟。
2.3 400 g，离心 3-4 分钟，弃去上清。
2.4 加入 PBS 洗涤细胞两次，每次 5 分钟。
2.5 用 1 mL 无血清培养基或 PBS 重悬细胞后，使用荧光显微镜或流式细胞仪进行观察。
3. 细胞染色 (贴壁细胞)
3.1 将贴壁细胞培养于无菌盖玻片上。
3.2 从培养基中移出盖玻片，吸除多余培养基。
3.3 加入 100 μL 染料工作液，轻轻晃动使其完全覆盖细胞，37℃ 孵育 30-45 分钟。
3.4 吸去染料工作液，用培养基洗 2-3 次，每次 5 分钟，使用荧光显微镜或荧光酶标检测仪进行观察。