操作指南(以下是 SparkJade 的推荐方案。本方案仅提供指导原则,请根据您的具体实验进行修改)
1. Cardiogreen 在细胞中的摄取试验:
Cardiogreen (Foxgreen,indocyanine green) 是一种无毒的生物染料,只有经静脉注射后才能被肝细胞吸收,然后由肝细胞分泌。在无血清培养基中培养时,肝细胞摄取 Cardiogreen,细胞质呈绿色。血清恢复后, Cardiogreen 从细胞质中分泌出来。
1.1 将 Cardiogreen 加入终浓度为 1 mg/mL 的无血清肝细胞培养基中,在 37℃ 下培养 1 小时。
1.2 除去无血清培养基,用 PBS 洗涤细胞三次。
1.3 用显微镜对细胞检查和成像。
2. 研究 Cardiogreen 脂质体对小鼠尿路的成像 [2]:
0 ~ 0.8 μM Cardiogreen 分别与 1% 脂质体和 20 μM 或 200 μM pyrene 孵育,评估极性和流动性。用荧光分光光度计测定激发波长 335 nm 处的荧光光谱。
2.1 小鼠在异氟醚 (1%-2%;v/v) 麻醉下刮毛,并使用体内成像系统进行基线扫描。
2.2 将 200 μL 8 mg/kg 的 Phospholipon 50 Cardiogreen 脂质体或 2 mM 蔗糖缓冲液 (pH 7,蔗糖含量为 9.3%) 中的游离 Cardiogreen 注射到尾静脉中,在长达 120 分钟的时间内反复扫描小鼠。
2.3 在离体研究中,动物按上述方法处理,注射后10 分钟,在颈椎脱臼麻醉下处死。
2.4 在肝素化的 96 孔板中收集心脏血液并收获组织。在采集过程中,组织和血液样本避光并保存在冰上。
2.5 生物分子成像仪扫描血液和组织。
3. 研究 Liposomal Cardiogreen 在泌尿系统积累:
3.1 脂质体或游离 Cardiogreen (8 mg/kg)。尾静脉注射,3 分钟后腹腔注射大剂量戊巴比妥。
3.2 注射 Cardiogreen 后总活跃循环时间约为 10 分钟。
3.3 此后,小鼠接受剖腹中线手术,充分暴露腹膜。
3.4 确定输尿管起源于肾脏,将其远端夹住或松绑来确定。
3.5 小鼠被切除子宫以方便膀胱识别。
3.6 用生物分子成像仪对动物进行扫描。