操作指南 (以下是 SparkJade 的推荐方案。本方案仅提供指导原则,请根据您的具体实验进行修改)
1. ER-Tracker 工作液的配制
1.1 ER-TrackerRed 以 1 mM 的 DMSO 储存液形式提供,使用前请将 ER-Tracker Red 从冰箱内取出,确保回温至室温或于 25℃ 水浴温育直至完全融解,经短暂离心将所有溶液沉到管底。第一次使用将储存液根据单次用量分装,≤-20℃ 避光干燥保存。
1.2 用预热好的无血清细胞培养基或 PBS 稀释储存液,配制成 100 nM-1 μM 的 ER-Tracker工作液。
【注】请根据实际情况调整 ER-Tracker 工作液浓度,且现用现配。
2. 细胞染色(悬浮细胞)
2.1 离心收集细胞,加入 PBS 洗涤两次,每次 5 分钟。细胞密度在 1×106/mL。
2.2 加入 1 mL ER-Tracker 工作液,室温孵育 5-30 分钟。
2.3 400 g,离心 3-4 分钟,弃去上清。
2.4 加入 PBS 洗涤细胞两次,每次 5 分钟。
2.5 用 1 mL 无血清培养基或 PBS 重悬细胞后,使用荧光显微镜或流式细胞仪进行观察。
3. 细胞染色(贴壁细胞)
3.1 将贴壁细胞培养于无菌盖玻片上。
3.2 从培养基中移出盖玻片,吸除多余培养基。
3.3 加入 100 μL 染料工作液,轻轻晃动使其完全覆盖细胞,孵育 5-30 分钟。
3.4 吸去染料工作液,用培养基洗 2-3 次,每次 5 分钟 ,使用荧光显微镜进行观察。
【注】若需要用流式细胞仪检测,需将细胞用胰蛋白酶消化重悬后再进行染色。