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✦小RNA有大作用✦
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近年来,microRNA的相关研究越来越热门,通过NCBI PubMed数据库的检索可以发现,microRNA的PubMed文献篇数明显增加,2021年该方向的研究文献更是突破了2万篇。

 

 

 

 

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啥是microRNA呢?
 

 

microRNA(miRNA) 属于小RNA(small RNA)的一种,是一类由内源基因编码的长度约为20-24个核苷酸的非编码单链RNA分子,主要在真核生物中参与转录后基因的表达调控。

 

在动植物以及病毒中已经发现有28645个miRNA 分子(Release 21: June 2014)。大多数miRNA 基因以单拷贝、多拷贝或基因簇的形式存在于基因组中(Lagos2Quintanaet al, 2001;Lau et al,2001) 。

 

 

 

 

 

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长度虽短,也是有背景的~
 

 

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He L, et al. (2004)Nat Rev Genet

 

 

microRNA(miRNA)也是基因转录来的,在基因组上也有其编码的位点,通常位于基因间(intergenic)或位于内含子(intronic)区域。

 

在细胞核内,基因组DNA 进行初级转录,转录生成较长的RNA分子,有些可长达几千个碱基,具有5’端帽子和3’端polyA结构。这些长的RNA分子被双链RNA特异的核糖核酸酶Drosha切割成长度大约70-100碱基的、具发夹结构的RNA分子,前体microRNA(pre-miRNA)。前体microRNA通过核输出蛋白exportin5 机制转运到细胞质,然后被第二个双链RNA特异的核糖核酸酶Dicer切割,得到20-24nt大小的成熟的miRNA产物。

 

 

 

 

 

 

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不要小看我,我的命名也很严格哦
 

 

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miRNA成熟体命名规则,以动物miRNA为例:

 

①确定命名规则之前发现的miRNA,保留原来名字,如hsa-let-7。

②命名规则详解:首先是物种名称,其次是miR(miRNA成熟体简写),然后阿拉伯数字(被发现的先后顺序),高度同源的miRNA在数字后加上英文小写字母(a,b,c,…)。由不同染色体上的DNA序列转录加工而成的具有相同成熟体序列的miRNA,则在后面加上阿拉伯数字以示区分,如hsa-miR-199a-1和hsa-miR-199a-2。另外,通常一个miRNA前体两个臂可能分别产生miRNA,这时有两种命名,一是在表达水平较低的miRNA后面加上*号,如rno-miR-9*。二是如果没有明显的表达差异,则以“-5p”和“-3p”分别命名。如hsa-miR-26b-5p和hsa-miR-26b-3p,分别表明从hsa-mir-26b前体的5’端臂和3’端臂加工而来的。

 

 

 

 

 

 

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我很优秀,小RNA也有大作用!
 

 

miRNA可以通过破坏靶mRNA的稳定性、抑制靶mRNA的翻译来对靶mRNA发挥调控作用。成熟的单链miRNA与类似RNA诱导沉默复合物(RISC)结合,形成miRNA 蛋白复合物miRISC, 并参与RNA干扰反应(RNAi)。在动物中,结合在复合物上的miRNA会结合到序列基本互补(并非完全互补)的mRNA上,但这种结合往往不像RNAi反应那样参与mRNA降解,而是阻止所结合的mRNA的翻译,导致相应基因表达水平的下降。大约60%的miRNAs为独立表达,15%左右的miRNAs成簇表达,还有25%的miRNAs位于内含子。

 

miRNA的研究取得了不少成果,研究成果表明其在细胞生长、个体发育和疾病发展等过程中起重要作用。自lin-4、let-7发现参与调控线虫时序发育以来,又在拟南芥、果蝇、斑马鱼、人类等很多样本发现可以调控胚胎发生及器官分化的miRNA。miRNA可以调控信号通路和代谢过程,比如发现miR-122调控CAT-1、AMP信号通路,调节肝脏中氨基酸代谢和脂肪代谢。在疾病的研究中,miRNA也起到很重要作用,miRNA可以调控疾病的发生和发展,比如miR-144、miR-150、miR-182、miR-103、miR-107等与二型糖尿病有关;miR-9、miR-29a、miR-29b与阿尔兹海默症有关。一些miRNA也是一些疾病的标志物,对疾病诊断有重要作用。miRNA与肿瘤作用是双面性,有抑制也有促进作用,主要看作用的靶基因,比如miR-331-3p在肝癌的发生中起到刺激作用,而miR-122在肝癌的抑制过程中发挥作用。另外,miRNA药物的作用机理也显现出医学上的潜在突破。

 

 

 

 

 

 

 

 

 

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来了!思科捷来助力你的miRNA实验

 

 

 

 
 
01
miRNA的提取

对miRNA的研究分析方法很多,如miRNA靶基因的预测分析、GO富集分析、miRNA测序、 ceRNA分析、芯片分析、表达分析等。其中,miRNA的提取是最基础的实验步骤,思科捷miRNA提取有多种样本试剂盒,采用专门吸附miRNA的特殊硅基质膜,配合独特的裂解液和缓冲液,能够高效率获得高纯度的miRNA。

 

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AC0205  特别安利哦!

 

 

 

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速度与纯度,性能与价格,

 

就是这么匹配~

 

 

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02
miRNA的RT-qPCR

miRNA的长度比较短,因此常规的RT- qPCR 很难对其进行直接定量分析,需要借助技术手段在逆转录过程中对其加长处理,目前常用的方法有加尾法和茎环法。思科捷都有哦~~~

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