520，别人晒花晒礼物，

我们科研人晒WB。

曝光结束的那一刻，

居然跑出一颗心形条带——

原来连蛋白都在悄悄表白：

520，科研也有浪漫。

《心形条带》不一样的表白

当然了，浪漫归浪漫，实验还是要重做

我们显影时遇到各种异常情况该怎么解决呢

情景一PART 01

条带歪七扭八

常见原因：

绝大多数是因为凝胶聚合不均匀，或者是电压不稳。  

解决方案：

制胶：配胶前先验漏；胶液充分混匀，立即灌胶，等胶完全凝固后使用。

电泳：恒压分离，常规凝胶用80V跑浓缩胶，120V跑分离胶。电泳液务必没过短玻璃板，防止短路；如果电泳温度高，可以冰浴电泳。

情景二PART 02

背景脏

分析原因：

封闭不够、洗膜不充分、抗体浓度过高、曝光过度。  

解决方案：  

封闭：推荐无蛋白快速封闭液（货号：ED0023），5-15min即可完成封闭，可最大程度地降低背景；避免多张膜在一起封闭、漂洗、孵育

漂洗：TBS-T洗涤3次×10分钟，漂洗液充分覆盖膜；  

抗体：按说明书摸索稀释比例，一抗建议4℃过夜；  

曝光：根据蛋白表达高低，选择最适灵敏度的发光液，高表达选择中灵敏度（货号：ED0025），低表达选择高灵敏度（货号：ED0015）。

情景三PART 03

条带位置不对

原因： 

蛋白修饰、样本降解、电泳液缓冲能力下降。  

解决方案：  

蛋白修饰：翻译后修饰会导致蛋白分子量变大，通过查文献看一下蛋白是否有修饰。  

样本制备：条带位置偏低可能是蛋白发生降解，样品制备时要加蛋白酶抑制剂，加入上样缓冲液后煮沸5-10min，上样前轻轻离心去除不溶性杂质。

电泳：电泳缓冲液离子强度不对、反复使用过多次都会导致迁移异常，建议电泳液现用现配。重复使用不超过3次，回收的电泳液放在4度保存，一周内用完。

爱情来得太快，就像龙卷风~